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    分光光度计应用案例分析

    发布时间:2021-06-04      点击次数:726

    本文通过应用紫外可见分光光度计研究动物试验对裂褶菌发酵胞内多糖的祛痰作用。采用小鼠酚红祛痰法观察裂褶菌发酵胞内多糖的祛痰作用。裂褶菌发酵胞内多糖能增加小鼠呼吸道酚红排泌量。实验结果证明裂褶菌发酵胞内多糖具有一定的祛痰作用。

     

    关键词 

    分光光度计;裂褶菌;胞内多糖;发酵;酚红祛痰法;祛痰效果

     

    裂褶菌又名白参、树花等,隶属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、裂褶菌科、裂褶菌属,是一种食药兼用菌[1]。其分布广泛,在民间被广泛用于治疗小儿盗汗、妇女白带增多、神经衰弱、头昏耳鸣等症[2]。裂褶菌多糖是指从裂褶菌子实体、菌丝体以及发酵液中提取出来的水溶性多糖,是裂褶菌中最主要的生物活性物质之一,具有抗肿瘤、抗菌、抗辐射、提高机体免疫力等多种药理活性。由单一组分的β-(1-3)-D葡聚糖组成,其中每3个葡萄糖分子上连有1个β-(1-6)的分支[3-5]。经研究表明,裂褶菌发酵多糖具有很好的抗炎作用。因此,推测裂褶菌发酵多糖具有祛痰的潜在功能,本研究进行了验证性研究。

     

    1材料与方法

    1.1试验材料

    供试菌株:裂褶菌菌种由四川省绵阳市食用菌研究所提供

    试验动物:昆明种小鼠,雌性,体重(20±2)g,6周龄,由长春高新医学实验动物中心提供,合格证号为10-5113

    仪器:电子天平(梅特勒AL104)、UV-5100型紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)

    试剂:阳性药川贝枇杷糖浆,江西三九药业有限公司,批号100305J;苯酚红、碳酸氢钠、氢氧化钠为国产分析纯

     

    1.2试验方法

    1.2.1裂褶菌液体发酵培养

    将配制好的综合培养基分装入容量为250mL的三角瓶内,每瓶装液量为100mL,121℃、20min灭菌、冷却至室温备用。在超净工作台上,每瓶接种直径为6mm的菌饼5~7片。接种后静置培养12h后置于26℃、120r/min摇床上培养7d[6],然后转入装有400mL综合培养基的1000mL三角瓶中,置于26℃、120r/min摇床上培养7d,发酵结束后,抽滤分离菌丝体及发酵液,菌丝体60℃烘干至恒重,备用。

     

    1.2.2 裂褶菌胞内多糖的提取与纯化

    收集的菌丝体按液料比1∶5在室温条件下用蒸馏水超声提取1次,每次30min,超声频率70Hz,然后置于80℃的恒温水浴锅中浸提5次,浸提的时间分别为5、4、3、2、1h。合并水提液,加入0.5%的活性炭吸附20min,过滤脱碳,减压浓缩,用3倍体积的95%乙醇进行沉淀,于4℃冰箱中静置过夜。将获得的白色纤维状沉淀,复溶,用3倍体积的95%乙醇再沉淀,重复3次,收集沉淀,再用无水乙醇洗涤3次,直至析出液中无还原糖反应为止。于60℃条件下烘干,得裂褶菌胞内多糖[7]

     

    1.3模型与数据分析

    1.3.1祛痰动物模型的建立

    取昆明种小鼠50只,随机分为5组,即空白对照组、阳性药对照组(20mL/kg)、裂褶菌发酵胞内多糖高剂量(500 mg/kg)、裂褶菌发酵胞内多糖中剂量(250 mg/kg)、裂褶菌发酵胞内多糖低剂量(125 mg/kg),每组10只。各组小鼠按体重灌胃给药(20mL/kg),每天1次,连续给药5d,其中空白对照组给等体积生理盐水。试验前各组小鼠禁食16h。末次给药后1h后,由腹腔注射5%酚红溶液0.2mL/10g,注射后30min脱颈椎处死小鼠,仰位固定于手术板上,剪开颈正中皮肤,分离气管周围组织,剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管。放入盛有3mL生理盐水的试管中,再加入5%碳酸氢钠溶液0.1 mL,使气管段中的酚红完全释放,用UV-5100型紫外可见分光光度计测波长在546nm范围内的OD值,用酚红绘制标准曲线,根据曲线计算酚红含量[8-10]

     

    1.3.2统计学处理。

    运用SPSS12.0软件进行统计学处理,分析组间差异,试验结果用(x±s)表示。

     

    2、结果与分析

    裂褶菌发酵胞内多糖对小鼠呼吸道酚红排泌量的影响试验结果显示,裂褶菌发酵胞内多糖高剂量组、川贝枇杷糖浆组均能增加小鼠呼吸道酚红排泌量,与空白对照组相比较,有统计学差异(P<0.05)。表明裂褶菌发酵胞内多糖具有祛痰作用(表1)。

    表1 裂褶菌发酵胞内多糖对各组小鼠呼吸道酚红排泌量的影响

    组别

    小鼠数(只)

    剂量

    酚红浓度(µg/ml)

    空白对照

    10

    -

    1.01±0.33

    阳性药对照

    10

    20

    1.51±0.51

    高剂量

    10

    500

    1.54±0.62

    中剂量

    10

    250

    1.36±0.55

    低剂量

    10

    125

    1.11±0.52

     

     

    3、结论与讨论

    祛痰的作用原理大多为增加呼吸道分泌,使痰液变稀,或降低痰液中的黏性成分,使痰液黏度下降,或增加呼吸道黏膜上皮细胞纤毛的运动,使痰液易于咳出。酚红祛痰试验是利用酚红部分地从呼吸道排泄的特点,在化痰药的作用下,随着支气管分泌的增加,由呼吸道黏膜排出的酚红也增多,用分光光度计测出酚红的排泌量,从而得知药物化痰作用的强弱[11]。本试验利用酚红作为祛痰效果指示剂,在川贝枇杷糖浆及裂褶菌发酵胞内多糖的作用下,使呼吸道黏膜排出的酚红增加,从而证实支气管分泌液增加。本试验研究结果显示,裂褶菌发酵胞内多糖高剂量组能增加小鼠呼吸道酚红排泌量,使小鼠呼吸道分泌液明显增加,与空白对照组相比较,有统计学差异(P<0.05)。表明裂褶菌发酵胞内多糖具有祛痰作用。本试验证明了裂褶菌发酵胞内多糖的祛痰药理作用,为临床合理开发应用裂褶菌多糖提供了药理学依据,例如祛痰糖浆。同时,为进一步地研究裂褶菌发酵多糖提供了一定的科学依据。

     

    4、参考文献

    [1] 卯晓岚.中国经济真菌[M].北京:科学出版社,1998:48

    [2] 黄年来,杨庆尧,张甫安,等.中国食用菌百科[M].北京:中国农业出版社,1997:119.

    [3] 赵琪,袁理春,李学春.裂褶菌研究进展[J].食用菌学报,2004,11(1):59-63.

    [4] 邓百万,陈文强,李志洲.裂褶菌营养菌丝蛋白质成分的分析[J].氨基酸和生物资源,2003,25(4):1-2.

    [5] 冀颐之,迟文鹤,杜连祥.裂褶菌胞外多糖发酵条件的研究[J].药物生物技术,2003,10(1):17-21.

    [6] 王振河,万学东,武忠伟,等.正交设计优化裂褶菌发酵全液多糖提取工艺[J].中国野生植物资源,2007,26(4):50-56.

    [7] 李雪.裂褶菌液体发酵条件及发酵产物的药理活性研究[D].长春:吉林农业大学,2008.

    [8] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].2版.上海:上海科学技术出版社,2006:428.

    [9] 安然,梁茂新.白术镇咳祛痰、镇痛和止血潜在作用的实验研究[J].中医杂志,2010,51(12):1125-1127.

    [10] 李显华,宋达夫,甘雨,等.固本清肺贴膏对小鼠止咳、祛痰作用的实验研究[J].实验动物研究,2010,27(4):40-41.

    [11] 魏东,姚斌,高兴亮,等.少年红矾杏平喘糖浆镇咳、祛痰和平喘作用的实验研究[J].微循环学杂志,2009,19(2):29-32.

     

    文章内容来源于:刘伟峰,于浩然,王琦.裂褶菌液体发酵胞内多糖祛痰作用的试验研究[J].现代农业科技,2011,9.

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